微生物的限度檢驗(yàn)，定量微生物檢驗(yàn)方法，待檢的微生物在固體表面上生長(zhǎng)，繁殖形成肉眼可見(jiàn)的菌落后，才能夠得到定量的數(shù)值。
1.篩選菌株的原理
選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許特定種類(lèi)的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類(lèi)微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱(chēng)做選擇培養(yǎng)基。
微生物的選擇培養(yǎng)：在選擇培養(yǎng)基的配方中，把尿素作為培養(yǎng)基中的唯一氮源，只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長(zhǎng)；把纖維素作為培養(yǎng)基中的唯一碳源，只有能夠利用纖維素的微生物才能夠生長(zhǎng)；在無(wú)氮源的培養(yǎng)基上，只有自生固氮菌才能夠生長(zhǎng)。
選擇培養(yǎng)基應(yīng)用實(shí)例
①培養(yǎng)基中加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌。
②培養(yǎng)基中加入高濃度的食鹽可得到金黃色葡萄球菌。
③培養(yǎng)基中缺乏氮源時(shí)，可以分離出固氮微生物，因?yàn)榉枪痰⑸锊荒茉诖伺囵B(yǎng)基上生存。
④當(dāng)培養(yǎng)基的某種營(yíng)養(yǎng)成分為特定化學(xué)成分時(shí)，也具有分離效果。如石油是唯一碳源時(shí)，可以抑制不能利用石油的微生物的生長(zhǎng)，而使能夠利用石油的微生物生存，得到能消除石油污染的微生物。
⑤改變微生物的培養(yǎng)條件，也可以達(dá)到分離微生物的目的，如將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)只能得到耐高溫的微生物。
2.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法
(1)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法(抽樣檢測(cè)法或血球板計(jì)數(shù)法)
①原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量。
②方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)算。
③缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。
(2)間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)
①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。
②操作：
a.設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。
b.為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。
③計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=圖片×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。注意：統(tǒng)計(jì)的菌落往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。
3.實(shí)驗(yàn)中的注意事項(xiàng)
(1)設(shè)立重復(fù)組：統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)時(shí)，要至少涂布3個(gè)平板作重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。
(2)對(duì)照原則：
對(duì)照實(shí)驗(yàn)是指除了被測(cè)試的條件以外，其他條件都相同的實(shí)驗(yàn)，其作用是比照實(shí)驗(yàn)組，排除任何其他可能原因的干擾，證明確實(shí)是所測(cè)試的條件引起相應(yīng)的結(jié)果。
設(shè)置對(duì)照的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。
①判斷培養(yǎng)基中是否有雜菌污染，需將未接種的培養(yǎng)基同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)。
②判斷選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用，需設(shè)立牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行接種后培養(yǎng)，觀察兩種培養(yǎng)基上菌落數(shù)目，進(jìn)行對(duì)比得出結(jié)論。
(3)在微生物數(shù)量測(cè)定時(shí)，應(yīng)選取具有合適的菌落數(shù)的培養(yǎng)基，如細(xì)菌、放線(xiàn)菌、酵母菌以每個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)有30～300個(gè)菌落數(shù)為宜；霉菌以每個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)有10～100個(gè)菌落數(shù)為宜。
